(i)能够阻碍DNA聚合酶在反转录过程的单碱基延伸;
(ii)能够降低缺口连接酶的连接效率。SELECT方法采用荧光定量PCR的方法进行定量。结合方法优化,发展了SELECT方法的3个应用实例:
(i)在生物学样本总RNA或总mRNA中检测mRNA或lncRNA上单位点是否含有m6A修饰;
(ii)检测生物学样本中特定m6A位点的修饰比例;
(iii)鉴定m6A甲基转移酶或去甲基酶的生理作用靶点。SELECT方法不仅简化了生物学样品中m6A修饰的检测过程,实现低丰度RNA中m6A单碱基分辨率的检测,还能够应用于其他RNA化学修饰的检测中,例如N1-甲基腺嘌呤(N1-methyladenosine,m1A)和2’-O-甲基化修饰(2’-O-methylation,Nm)等。
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